K používání a měření webu využíváme cookies. Používáním tohoto webu souhlasíte se způsobem, jakým s cookies nakládáme. Další informace

Konfokální mikroskopie - srovnání

Při konfokální mikroskopii je potlačen signál ze vzorku, který pochází z oblasti mimo ohniskovou rovinu. Díky tomu lze pozorovat preparáty o větší tloušťce, při zachování vysokého kontrastu.

Máte zájem o tuto aplikaci? Potřebujete radu?
Kontaktujte nás

Na rozdíl od snímání klasickým fluorescenčním mikroskopem v režimu widefield je u konfokálního mikroskopu potlačen signál ze vzorku, který pochází z oblasti mimo ohniskovou rovinu. Díky tomu lze pozorovat preparáty o větší tloušťce, při zachování kontrastu a vysokého poměru signálu vůči šumu. Na konfokálním mikroskopu vybaveném detektorem nebo kamerou a pracovní stanicí s příslušným software (Imaris) je pak uživatel schopný digitálně rekonstruovat trojrozměrný model celého preparátu (3D vizualizace).

Existují dva hlavní přístupy: 

Schématické znázornění konvenčních mikroskopických technik (Andor, 2016)
Obrázek 1:. Schématické znázornění konvenčních mikroskopických technik (Andor, 2016)

Nevýhodou laserové skenovací konfokální mikroskopie je soustředění velice intenzivního laserového paprsku na každý zobrazovaný bod (pixel). Tím je preparát dlouhodobě vystaven toxickým účinkům světla. Navíc je nutné, aby světlo z laserového paprsku dopadlo na všechny snímané body postupně, z čehož vyplývá výrazné omezení rychlosti snímání, především při vysokém rozlišení (např. 2048 × 2048 pixelů). K potlačení signálu z oblasti mimo ohniskovou rovinu dochází použitím „pinhole“ o variabilní velikosti, která je umístěna před detektorem.

Widefield (vlevo), konfokální mikroskopie (vpravo). Jedna optická rovina (60x 1.2NA).

Obrázek 2.: Widefield (vlevo), konfokální mikroskopie (vpravo). Jedna optická rovina (60× 1.2 NA). Obrázky pořízené v režimu widefield obsahují signál z oblasti mimo ohniskovou rovinu. Konfokální mikroskop na bázi rotujícího disku poskytuje ostrý obraz z jedné ohniskové roviny s více detaily a také s vyšším kontrastem a dynamickým rozsahem. Dragonfly, Andor (Andor, 2016).

Konfokální mikroskop na bázi rotujícího Petráňova/Nipkowova disku (spinning disc)

Uspořádání optické cesty - SDCMSpinning Disc mikroskop dosahuje velmi rychlého snímání obrazu o vysokém rozlišení. Excitační optická dráha vede skrze tzv. rotující disk obsahující vysoké množství „pinholes“, které zajišťují konfokalitu získaného obrazu (Obrázek 3.).

Již při pootočení disku o několik stupňů dosáhneme pokrytí celého zorného pole (rychlosti se pohybují kolem 6000 otáček za minutu – Dragonfly). Další výhoda konfokálního mikroskopu na bázi rotujícího disku je použití citlivých a velice rychlých kamer s vysokým dynamickým rozsahem pro detekci obrazu jako jsou kamery Andor Zyla nebo Andor iXon.

Klíčové výhody spinning discu

  • Vysoká rychlost snímání (stovky až tisíce snímků za sekundu)
  • Vysoká citlivost (kvantová účinnost kamer až 95 %)
  • Nízká foto-toxicita
  • Redukovaný foto-bleaching
Zdroj zprávy: „Spinning Disk Confocal – A Technical Overview...“ Accessed November 25, 2016 www.andor.com/learning-academy/spinning-disk-confocal-a-technical-overview

Produkty pro Konfokální mikroskopie - srovnání

Dragonfly

Dragonfly

Systém pro vysokorychlostní konfokální mikroskopii dosahující až 100 fps při plném rozlišení

Imaris

Imaris

Software pro 3D vizualizaci a intuitivní analýzu objemných obrazových dat

Zyla 4.2

Zyla 4.2

Extrémně rychlá a citlivá kamera se senzorem sCMOS

iXon Ultra 888

iXon Ultra 888

Nejcitlivější EM CCD kamera na trhu s 1Mpx rozlišením

KONTAKTNÍ FORMULÁŘ