Hlavní skupinou proteinů v buněčném jádře eukaryotických buněk jsou proteiny, které se dokáží navázat na DNA ve formě chromatinu (chromatin binding protein). Právě proces vazby chromatin-binding proteinů na DNA je velice dynamický a ovlivňuje genovou expresi.
Obrázek 1.: Jádro myších embryonálních kmenových buněk, zelená – H1 – YFP. Vlevo – snímek fluorescenčního signálu z proteinu H1. Uprostřed – snímek zachycující stav po cíleném vysvícení (photobleaching) metodou FRAP. Vpravo – částečné navrácení fluorescenčního signálu do vysvíceného místa (recovery).
Pro studium procesu asociace a disociace chromatin-binding proteinů (HP1, H1) na DNA in vivo bylo použito fluorescenční značení (fluorescent tag) pomocí žlutého fluorescenčního proteinu (YFP). V jádrech myších embryonálních kmenových buněk byla mikroskopem pozorována fluorescence (Obrázek 1, vlevo) potvrzující přítomnost označených proteinů (HP1, H1). Pro studium odehrávajících se dynamických procesů bylo metodou FRAP vysvíceno (photobleaching) určité konkrétní místo v pozorovaném jádře – umožněno modulem pro aktivní osvětlení. Následovně se díky možnosti snímání v čase získal signál zachycující remodelace chromatinu a změnu fluorescenčního signálu na vysvíceném místě v pozorovaných jádrech.
Graf 1.: znázornění FRAP zaměřené na proteiny HP1 a H1.
Ze získaných dat se zjistily poločasy trvání asociace proteinů HP1 a H1 na chromatin a také rozdíly těchto poločasů u různých forem chormatinu – heterochromatin/euchromatin
Možnosti modulu pro aktivní osvětlení – Mosaic3:
- Osvětlení více oblastí zájmu zároveň (DMD – digital mirror device)
- Inkorporovaná paměť pro ukládání vzorů osvětlení
- Světelný zdroj: Laser
- Aktivní osvětlení o maximální rychlosti 5000 fps
- Minimální čas expozice je 50–200 μs
- Kompatibilní s většinou mikroskopů od předních světových výrobců
„FRAPPA – Study the Dynamics of Chromatin Binding Proteins.“ Accessed December 5, 2016. www.andor.com.
